Kolumny do chromatografii cieczowej HPLC

Wybór odpowiedniej kolumny HPLC ma ogromny wpływ na jakość i dokładność analizy chromatograficznej. Kluczowe znaczenie ma dopasowanie typu wypełnienia, rozmiaru cząstek i innych parametrów do właściwości badanych związków oraz warunków rozdziału. Właściwa konserwacja i przestrzeganie zaleceń producenta pozwalają na wydłużenie żywotności kolumny i utrzymanie jej wysokiej sprawności przez długi czas.

Rodzaje wypełnień kolumn HPLC

Fazy odwrócone (RP)
W chromatografii cieczowej HPLC, układ faz odwróconych (RP-HPLC) to taki, w którym faza stacjonarna jest mniej polarna niż faza ruchoma. Najczęściej stosowane wypełnienia to modyfikacje żelu krzemionkowego grupami alkilowymi, takimi jak C18, C8 czy C4. Fazy te mają charakter hydrofobowy i są wykorzystywane do rozdzielania substancji nierozpuszczalnych lub słabo rozpuszczalnych w wodzie.

Fazy normalne (NP)
Układ faz normalnych (NP) charakteryzuje się tym, że faza stacjonarna jest bardziej polarna niż faza ruchoma. Najczęściej stosowanym wypełnieniem jest żel krzemionkowy, rzadziej tlenek glinu czy ditlenek tytanu. Fazy te są przydatne do rozdzielania związków niejonowych o niskiej i średniej polarności.

Fazy jonowymienne
Wymieniacze jonowe to nierozpuszczalne substancje wielkocząsteczkowe o budowie jonowej, zdolne do wymiany jonów. Stosuje się je do analizy związków jonowych. Przykładem są wymieniacze anionowe zawierające czwartorzędowe aminy oraz wymieniacze kationowe z grupami sulfonowymi.

Fazy z podziałem na rozmiar cząsteczek (SEC)
Chromatografia żelowa, zwana także sitową, wykorzystuje żele polimerowe o określonych wielkościach porów. Rozdzielanie zachodzi na skutek różnicy mas molowych analizowanych związków. Cząsteczki o mniejszych rozmiarach penetrują pory żelu, co spowalnia ich migrację wzdłuż kolumny.