Poprawiono skuteczność testu Schirmera

Poprawiono skuteczność testu Schirmera

Papierowy test Schirmera pozwala na zdiagnozowanie przyczyn problemów z suchymi oczami i służy do pomiaru objętości łez. Ponieważ przy okazji tego testu pozyskuje się białka znajdujące się we łzach, pozwala on również na wykrywanie chorób. Dotychczasowa metoda analizy narażona jest jednak na utratę cennych informacji poprzez wielokrotne ekstrahowanie próbki w kolejnych naczyniach. Nowa, ulepszona metoda pozwala na zachowanie i zanalizowanie wielu białek występujących we łzach w małych ilościach.

Naukowcy ze Szpitala Uniwersyteckiego w Oslo opracowali metodę ekstrakcji składników z łez w jednym naczyniu. W celu potwierdzenia skuteczności nowej metody zrobiono 48 testów Schirmera pochodzących od 3 uczestników badań. Następnie testy te parami umieszczono w specjalnej wirówce, dodano rozpuszczalnik i odwirowano z prędkością 300 obr./min. Następnie na 5 minut zwiększono szybkość do 7500 obr./min. i wyciągnięto paski. Następnie odparowano rozpuszczalnik i pozostałe w naczyniu białka poddano kilku kolejnym reakcjom chemicznym – redukcji, alkilowaniu oraz reakcji trawienia przy pomocy trypsyny.

Tak przygotowane białka poddano jednowymiarowej analizie LC/MS i otrzymane wyniki porównano z bazą ludzkich białek UniProtKB. Podczas analizy przetestowano 8 różnych rozpuszczalników, co pozwoliło na późniejszą optymalizację metody. Najlepszym z nich okazał się 100 mM węglan amonu zawierający 50 mM chlorku sodu. Taki rozpuszczalnik pozwolił na rozdzielenie 309 białek. Chlorek sodu został dodany z uwagi na fakt, że znajduje się on we łzach i może ułatwiać rozpuszczanie białek, co okazało się prawdą i pozwoliło na zwiększenie liczby wykrytych białek z 290 do 309. Z użyciem dwuwymiarowego chromatografu LC/MS i mocnej, kationowymiennej chromatografii liczbę wykrytych białek zwiększono do 1526 białek. Tak duża liczba białek daje dużo większe szanse na zdiagnozowanie takich chorób jak: jaskra, zwyrodnienie plamki żółtej, zapalenie błony naczyniowej oka, retinopatia cukrzycowa i inne.

(pj)